A coloração de GRAM foi desenvolvida em 1884
pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram, essa coloração classifica
as bactérias em dois grandes grupos : Gram – positivas e Gram- negativas.
Técnicas como esta são utilizadas apenas para visualizar morfologia, cor
e arranjo do microrganismo em questão. A técnica consiste nos seguintes passos
:
1º - Primeiramente, com o auxílio
de um swab ou uma alça de platina estéril deve-se coletar o microrganismo que
deseja ser corado.
2º - Pegar uma lâmina estéril e
com o auxílio de uma pisseta pingar uma gota d’água para facilitar a confecção
do esfregaço.
3º - Em movimentos circulares
espaçados deve-se espalhar o microrganismo pela lâmina, de maneira a evitar
acúmulo do material no mesmo local,caso contrário a visualização ficará comprometida,
feito isso, deve-se esperar secar.
4º - O primeiro corante a ser
adicionado é o violeta de genciana (aprox. 1 min), este impregna todas as
células, sendo denominada de coloração primária. Após esse curto período
deve-se lavar a lâmina afim de retirar o acesso do corante.
5º - Lugol é adicionado, agindo como um fixador,
atuando por aproximadamente 1 minuto, sendo em seguida a lâmina lavada.
6º - Lava-se a lâmina com álcool,
que age como um descolorante, removendo o púrpura das células de algumas
espécies, mas não de outras. As bactérias que retêm essa cor após a adição do álcool
são denominadas gram-
positivas, e as que perdem essa
coloração púrpura são denominadas gram - negativas ( Como ilustra o 6º passo da imagem).
7º - O álcool é lavado e por
último adiciona-se o corante fuccina que permanece por um curto período de tempo
e em seguida é lavado. Nessa etapa as bactérias que perderam a coloração de púrpura
e ficaram incolores adquirem a coloração rosa, são as denominadas bactérias gram- negativas.
O esfregaço seco e examinado microscopicamente.
Por que algumas bactérias de coram de roxa e outras de rosa?
Entre outros motivos destaca-se
diferenças estruturais nas paredes celulares das bactérias, as gram- positivas
possuem uma parede celular mais espessa de peptideoglicana que as bactérias
gram- negativas, dessa forma quando é aplicado o álcool elas não sofrem
descoloração por completo permanecendo púrpura.