Entendendo a coloração de GRAM

A coloração de GRAM foi desenvolvida em 1884 pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram, essa coloração classifica as bactérias em dois grandes grupos : Gram – positivas e Gram- negativas. Técnicas como esta são utilizadas  apenas para visualizar morfologia, cor e arranjo do microrganismo em questão. A técnica consiste nos seguintes passos : 

 

1º - Primeiramente, com o auxílio de um swab ou uma alça de platina estéril deve-se coletar o microrganismo que deseja ser corado.

2º - Pegar uma lâmina estéril e com o auxílio de uma pisseta pingar uma gota d’água para facilitar a confecção do esfregaço.

3º - Em movimentos circulares espaçados deve-se espalhar o microrganismo pela lâmina, de maneira a evitar acúmulo do material no mesmo local,caso contrário a visualização ficará comprometida, feito isso, deve-se esperar secar.

4º - O primeiro corante a ser adicionado é o violeta de genciana (aprox. 1 min), este impregna todas as células, sendo denominada de coloração primária. Após esse curto período deve-se lavar a lâmina afim de retirar o acesso do corante.

5º -  Lugol é adicionado, agindo como um fixador, atuando por aproximadamente 1 minuto, sendo em seguida a lâmina lavada.

6º - Lava-se a lâmina com álcool, que age como um descolorante, removendo o púrpura das células de algumas espécies, mas não de outras. As bactérias que retêm essa cor após a adição do álcool são denominadas gram- positivas, e as que perdem essa coloração púrpura são denominadas gram - negativas ( Como ilustra o 6º passo da imagem).

7º - O álcool é lavado e por último adiciona-se o corante fuccina que permanece por um curto período de tempo e em seguida é lavado. Nessa etapa as bactérias que perderam a coloração de púrpura e ficaram incolores adquirem a coloração rosa, são as denominadas bactérias gram- negativas. O esfregaço seco e examinado microscopicamente.

Por que algumas bactérias de coram de roxa e outras de rosa?

Entre outros motivos destaca-se diferenças estruturais nas paredes celulares das bactérias, as gram- positivas possuem uma parede celular mais espessa de peptideoglicana que as bactérias gram- negativas, dessa forma quando é aplicado o álcool elas não sofrem descoloração por completo permanecendo púrpura.